Metode de diagnostic de laborator

Metodele imunologice au o valoare importantă de diagnostic si de prognostic in multe boli reumatice.

Studiul imunitate nespecifică presupune investigarea numărului de leucocite și monocite în serul sanguin, se completează componentele, estimarea mobilității, fagocitare și activitatea bactericidă a fagocitelor mononucleare, producția de citokine proinflamatorii (IL-ip, IL-6, TNF-alfa și altele.).

Cel mai frecvent utilizat:
♦ inhibiția migrarea leucocitelor reacție (RTML) în prezența antigenilor și mitogene: RTML cu fitohemaglutinină (PHA), concanavalin A (Con A), alergeni streptococ hemolitic, stafilococ. Reacția se bazează pe proprietatea limfocitare sensibilizare la antigene specifice pentru a forma stabilizarea limfokine, inhibarea migrării leucocitelor; activitate funcțională mai mare a limfocitelor, mai mici figuri RTML;
♦ reacția de transformare a limfocitelor blastică (BTR), care este evaluată utilizând activitatea funcțională a limfocitelor T. Ca răspuns la mitogeni (PHA), Con A și ser antilimfocitică și colab., Transformarea limfocitară are loc in lymphoblasts (celulele blast mai mari se formează, cu cât activitatea limfocitelor T).
Subpopulații de limfocite T determinate cu anticorpi monoclonali.

Pentru a evalua starea funcțională a imunității umorale folosind determinarea cantitativă a imunoglobulinelor în plasma sanguină. Imunoglobulina (Ig) - sunt proteine ​​care posedă funcție de anticorpi și subdivizate în cinci clase majore: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG prezentă în ser, în cea mai mare concentrație (6,39-13,49 g / l), ea reprezintă 80% din activitatea de anticorpi. Distinge 4 subclasă IgG: lgG2 (60-70%), lgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) și lgG4 (1-3%).

IgA este cea mai mare imunoglobulină secretor găsit în salivă, lacrimi, bronșic și secrețiile intestinale și laptele matern. Secretele IgA dimerului este o formă care conține J-lanț, o altă peptidă, numita componenta secretorie. Concentrația IgA în standard este 0,7-3,12 g / l.

IgM cuprinde 5 subunități monomerice asociate prin punți disulfidice și J-lanț, formând un pentamer. Concentrația serică IgM se ridică în mod normal la 0,86-3,52 g / l.

IgD este în cantități infime în ser, dar este un tip de bază al imunoglobulinei prezente pe membrana limfocitelor B. IgE joacă un rol important în reacțiile de hipersensibilitate imediată.

Pentru a determina concentrația de clase majore de imunoglobuline (IgG, IgM, IgA), folosind metoda de imunodifuzie radială sau tehnica nefelometrice, IgE - radioimunologică extrem de sensibile sau imunoenzimatică tehnici.

Determinarea concentrației de imunoglobuline sunt utilizate pentru diagnosticarea imunodeficiențe primare sau secundare (în aceste cazuri, o scădere a concentrației de clase majore de imunoglobuline), iar immunoglobulinopaty monoclonal (în combinație cu ser imunoelectroforeza si urina).

Cea mai comună formă de imunodeficienta este IgA-immunodefi-op, a cărei dezvoltare este uneori observată în bolile reumatice și pot avea loc și pe fondul unor anumite medicamente (D-penicilamina, sulfasalazină, captopril și altele.). Concentrații crescute de IgA adesea observate în spondiloartropatia seronegativa, vasculita hemoragică, sindromul Sjogren, artropatie psoriazica.

Adesea, în bolile inflamatorii reumatice este observată dezvoltarea policlonal Hyper.
factorul reumatoid (RF) sunt autoanticorpi la Fc-fragment de IgG, deși acestea pot fi asociate cu IgM și IgA.

Poate ca blocarea factorului reumatoid autolog IgG, ceea ce conduce la o creștere a procentului de ascuns, kompleksirovannyhRumyniya (cu o durată prelungită a artritei reumatoide cu vistseritami).

Pentru vyyavleniyaRumyniyaklassa M aplică:
♦ latex de reacție de aglutinare inerte particulelor de latex acoperite cu Ig umană. Cea mai înaltă diluție dărnicia seroaglutinare titrul considerat reacție. Titrul de 1:20 sau mai mare este considerat pozitiv;
♦ răspuns Vaaler Rosa cu celule sanguine roșii de oaie, acoperite cu celule roșii din sânge de iepure anti-oaie.

Cea mai înaltă diluție ser care produce aglutinarea diagnostician semnificativă, în cazul în care nu mai puțin de 1:32.
Lupus (LE) celulelor p. Prezența LE-celulelor datorită prezenței în serul din clasa IgG la complexul ADN-histone, care reacționează cu nucleele sunt eliberate din diferite celule, ca urmare a distrugerii acestor celule. LE-celule se găsesc în 60-70% dintre pacienții cu LES. Ele sunt neutrofile mature, substanțe nucleare fagocitoza celulelor distruse. In citoplasma neutrofilelor constatat includerea omogenă mari (globulele hematoxilină).

În cazurile de fagocitoză incompletă de către neutrofilele acumulate în jurul soclu în formă de hematoxilina vițel (fenomen formarea rozetei). Rezultat detecta cel puțin LE-5 celule per 1000 de celule albe din sânge este considerat pozitiv. Suma unitate LE-celule se găsesc la 10% dintre pacienții cu RA, hepatită cronică activă, alergii la medicamente, nodosa periarterita, sclerodermie sistemica, dermatomiozita, boala mixtă de țesut conjunctiv.

Anticorpii antinucleari (AHA) cel mai adesea definite în bolile reumatice și apar la peste 90% dintre pacienții SZST. Ele sunt o familie de autoanticorpi care interacționează cu acizii ribonucleic și proteine, nucleu, antigene citoplasmatice. AHA determinat prin imunofluorescență indirectă, dublu imunodifuzia și kontrelektroforeza, ELISA și imunoblot.

Atunci când se utilizează metoda imunofluorescență indirectă în practică, există șase tipuri de colorare sau luminiscență, nuclee care sunt importante pentru diagnosticul bolilor sistemice ale țesutului conjunctiv:
Colorarea ♦ omogenă datorită prezenței anticorpilor ADN și histone dublu catenar, cel mai caracteristic LES si dozare lupus;
♦ Colorarea periferică cauzată de anticorpii care circulă la membrana nucleară (în special pentru LES);
♦ Colorarea granulară apare cel mai frecvent, indicând prezența diferitelor AHA, deci are cea mai mică specificitate (notat în LES, RA cu manifestări viscerale, boala mixtă de țesut conjunctiv);
♦ nucleolar (nucleolar) luminiscență datorită componentelor de anticorpi nucleol apare in SSc, boala Sjogren; ocazional ANF se găsesc în bolile endocrine (poliendokrinopatiya, diabet de tip I, tiroidită, tireotoxicoză), boli ale pielii (psoriazis, pemfigus) precum și pe fondul sarcinii dupa transplantul de organe și țesuturi (pentru reacția de dezvoltare „grefă contra gazdă“), y pacienții supuși hemodializei;
♦ luminiscență centromerică se observă în apariția anticorpilor la centromeres de cromozomi (MICs caracteristic cronicitate);






♦ lumina citoplasmatic indică prezența anticorpilor împotriva ARNt sintetaza, în special Jo-1 (comun in polimiozita dermatologice si).

Metode de imunodifuzia radioactive și legarea imun, radial, imunoprecipitare a relevat AHA la antigene nucleare specifice.

Anticorpii la acidul dezoxiribonucleic (ADN). Anticorpii la nativ ADN (dublu catenar), în special cele care sunt detectate prin teste radioimunologică (metoda Pharr), relativ specific pentru LES. Definiția lor este esențială pentru evaluarea activității bolii, estimarea dezvoltarea exacerbări și eficacitatea terapiei. Anticorpii la ADN denaturat (mono) mai puțin specifice pentru LES și adesea detectate în alte boli reumatice.

Anticorpii la histone. Histonelor - o componentă de bază, constând din trei subunități: doi dimeri H2A-H2B care flancat tetramer NS-H4 și asociată cu a treia subunitate constând din două rotații ale moleculei de ADN.

Anticorpii la histone H2A-H2B se găsesc în aproape toți pacienții cu sindrom de droguri lupus (novokainamidom induse), la pacienții tratați cu procainamida, dar nu au simptome de lupus, precum și la 20% dintre pacienții cu LES.

Anticorpi la ribonucleoproteina (RNP). Anticorpii la un ribonucleoproteinic cuprinzând un anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-Ro / SS-A, anti-La / SS-B, găsit în LES total mai mult de anticorpi la ADN dublu catenar. concentrația sanguină a acestor anticorpi este extrem de mare. S-au găsit în boala mixtă de țesut conjunctiv, cel puțin - la pacienții cu LES, care conduce manifestarea clinică a leziunilor cutanate, SSD subacute și alte boli reumatice autoimune.

Anticorpii la Sm (Smith) -antigenu. Anticorpii la Sm-antigen se găsește numai în LES. Folosind metoda imunofluorescentă sunt identificate în 30% din cazuri și 20% - conform metodei de hemaglutinare. Anticorpii la smi antigen nu este detectat în alte boli reumatice, astfel încât acestea sunt considerate ca markeri ai anticorpilor LES și detectarea lor este unul dintre criteriile de diagnostic pentru boala. În prezența Sm-anticorpi este observată pentru o boală malignă, sistemul nervos central, psihoza lupus si pastrarea relativa a funcției renale. Cu toate acestea, nivelul de anticorpi la smi antigen nu s-au corelat cu activitate si clinice subtipuri de LES.

Anticorpii la Ro (Robert) / SS-A sunt îndreptate împotriva ribonucleoproteine ​​nucleare, care sunt asociate cu ARN citoplasmatic Yl-Y5, transcrise de ARN polimeraza III. În funcție de sensibilitatea metodelor folosite pentru a studia anticorpul Ro / SS-A sunt gasite in 60-78% dintre pacienții cu sindrom Sjogren, la 96% dintre pacienții cu boala Sjogren si 35-57% dintre pacienții cu LES.

In LES datele de producție de anticorpi asociat cu un set specific de laborator și clinice manifestări ale tulburărilor: fotosensibilitatea, sindromul Sjogren, leziuni pulmonare, limfopenie și trombocitopenie hyperproduction RF. Creșterea concentrației de anticorpi la Ro / SS-A în combinație cu IgMRumyniyachasto hiper observate la subtipul boala ANF-negativ (la 2-5% dintre pacienții cu LES) - așa-numita lupus cutanat subacut.

Anticorpii la La (Lane) / SS-B îndreptat împotriva proteinei asociate transcriptele ARN polimerazei III. Anticorpii la La / SS-B, în majoritatea cazurilor apar în combinație cu anticorpi la Ro / SS-A, în timp ce acesta din urmă poate să apară în mod izolat. Anticorpii la La / SS-B sunt gasite in boala si sindromul Sjogren, combinat cu RA și LES (dar nu scleroderma sistemică), și ciroza biliară primară. In anticorpii cu LES la SS-B / La-antigen este mai probabil sa apara la inceputul bolii, care se dezvoltă în vârstă și este asociată cu o incidență mai scăzută a dezvoltării nefrită.

Anticorpii Scl-70 sunt, de obicei detectate în formă difuză a sclerozei sistemice. În această prezență boala Scl-70 anticorpi în combinație cu gene HLA-DR3 transport / DRw52 17 ori mai mare risc de a dezvolta fibroza pulmonara a crescut. Detectarea Scl-70 anticorpi la pacienții cu fenomen izolat Raynaud indică o probabilitate mare de a dezvolta sclerodermia sistemica.

Anticorpii Antitsentromernye (ASA) a găsit 20% dintre pacienții cu scleroză sistemică (majoritatea lor există dovada CREST-sindrom), cel puțin - în ciroza biliară primară (jumătate din acești pacienți, există semne de sclerodermie), și foarte rar - în hepatita cronică activă și primar hipertensiune pulmonară. Anticorpii împotriva centromere considerate ca un indicator de prognostic nefavorabil al dezvoltării sclerozei sistemice la pacienții cu sindrom Raynaud.

Anticorpi la aminoatsilsintetaze ARNt (antisintetaznye anticorpi) sunt detectate în prezența pacienților cu polimiozita boală pulmonară interstițială. In general sunt detectate anticorpi sintetazei la 40% dintre pacienții cu polimiozita, 54% dintre pacienții cu dermatomiozita idiopatică în cazul formelor acestor boli și doar 6% dintre pacienții cu polimiozita, care este una dintre manifestările altor DBST; in miozita tumorale, acești anticorpi nu au fost detectate. Produse antisintetaznyh anticorpi este asociat cu dezvoltarea așa-numitul „sindrom antisintetaznogo.“

Antifilaggrinovye anticorpi (LAP) sunt o familie, care include antikeratinovye anticorp anticorpi factor antiperinuklearny Sa-antigen și anticorpi pentru peptidă care conține citrulina ciclic descris recent. Conform conceptelor moderne, principalul determinant antigenic recunoscut de către acești anticorpi este peptide citrullinate, care, în special, prezent în sinovială pacientilor cu poliartrita reumatoida (RA). AFA sunt foarte specifice pentru RA. Cele mai utilizate pe scară largă sunt AFA în diagnosticul RA precoce. Mai multe studii au arătat un curs mai agresiv al RA în prezența acestor anticorpi la pacienți.

Anticorpi la fosfolipide (APL) - grup eterogen de autoanticorpi care reacționează cu încărcat negativ (fosfatidilserina, fosfatidilinozitol, cardiolipina) și (fosfatidiletanolamină, fosfatidilcolina) fosfolipide neutre. Acestea includ lupus anticoagulant, cardiolipin anticorpi și factori care determină dezvoltarea de fals pozitive Wasserman.

lupus anticoagulant (LA) - imunoglobuline din clasele IgG și / sau IgM, inhiba in vitro una sau reacții de coagulare mai fosfolipidzavisimyh, BA este tratat ca o familie reprezentativă de anticorpi la fosfolipide, sinteza lor este asociată cu dezvoltarea arterială sau tromboză venoasă.

Anticorpii anticardiolipinici (aCL). Pentru a determina CLA utilizat metoda Immunoassay. Produsele CLA (mai ales când titruri mari de IgG ACL), precum și formarea de BA, este asociat cu dezvoltarea sindromului antifosfolipidic.

reacție fals pozitive Wassermann este diagnosticul serologic rapid de sifilis printr-o metodă bazată pe standardul fosfolipida suspensie floculare (cardiolipina) ser pacient care conține anticorpi anti-treponemal (reagin). Pentru un diagnostic mai precis de sifilis folosind antigen treponemala metoda imunofluorescentă.

In 15-20% dintre pacienții cu LES este detectată reacție fals-pozitive Wassermann, iar 30% dintre indivizii sănătoși cu reacție fals pozitive Wassermann in LES in curs de dezvoltare ulterioară. Foarte adesea fals pozitive Wasserman detectate la pacienții cu sindrom antifosfolipidic.

Anticorpii tsitoplazmatineskie antineutrophil (ANCA). ANCA sunt o familie de autoanticorpi împotriva antigenilor specifici prezenți în citoplasmă neutrofile. Există două tipuri de ANCA care au determinat prin metoda imunofluorescență indirectă folosind neutrofilele fixe donatori de alcool absolut. Anticorpii pentru a provoca proteinaza difuze III (clasice) și strălucire citoplasmatic notată k-ANCA sau p-ANCA. Anticorpii împotriva mieloperoxidaza, elastaza și lactoferină sunt caracterizate de tip emisie perinuclear și desemnate ca perinuclear sau p-ANCA. ANCA sunt adesea detectate în vasculita sistemică.

antistreptococcal infecție streptococică determină o creștere a titrurilor de anticorpi. Anticorpii antistreptococcal Determinarea sunt utilizate pentru diagnosticul febrei reumatice acute (febra reumatică acută) și glomerulonefrita acută.

Cel mai larg determinarea anticorpilor la streptolizina O (ASL-O), streptokinaza (ACK) și streptodezoksiribonukleaze (anti-DNase B). Creșterea titrurile SLA-O se gaseste in mai mult de 2/3 din pacientii cu febra reumatica acuta, si doar jumatate din pacientii cu glomerulonefrita acută. titruri maxime anticorpi antistreptococcal identificate în timpul dezvoltării artritei și în timpul dezvoltării cardita și coree titrul acestor anticorpi sunt semnificativ mai reduse, ceea ce reduce valoarea diagnostică a acestui test.

Important pentru diagnostic sunt detecție reacția anticorpilor după o infecție: reacția Wassermann, completează reacția de fixare cu tuberculoză, pseudotuberculosis, Yersinia, Shigellosis si alte antigene, HBs-antigene, gonococice (reacția Bordet-Gengou) și bruceloza (reacție Wright-Heddlsona) antigeni titrul de anticorpi anti-Chlamydia.

Crioglobulinele - un grup de proteine ​​serice, cu capacitatea anormală la precipitare reversibilă sau formare de gel la temperatură scăzută. Crioglobulinele poate fi detectată în diverse boli ale organelor interne, inclusiv destul de des în bolile reumatice sistemice.

În funcție de compoziția crioglobulinele este împărțit în trei tipuri principale. Tipul I constă dintr-un imunoglobuline monoclonal IgA sau IgM, cel puțin - lanțuri ușoare monoclonale (proteina Bence Jones). Tipul II (observate în așa-numitul crioglobulinemia mixtă) compus din imunoglobulina monoclonali (de obicei, IgM, rareori - IgA sau IgG), antiglobulină având activitate împotriva IgG policlonal. Tipul III (observate în așa-numitul crioglobulinemia mixtă) este format din una sau mai multe clase de imunoglobuline policlonale. Cea mai comună formă de crioglobulinemia în bolile reumatice este el tipul III este găsit în LES, RA, scleroza sistemica, sindromul Sjogren.

Complexele imune circulante (CIC). Creșterea concentrațiilor reflectă activitatea inflamatorie și imunologică CEC a unui proces patologic în LES, RA, spondiloartropatia seronegativa.